鹽脅迫研究NMT標準化方案
鹽脅迫研究NMT標準化方案
一、視頻資源
二、參考文獻
C2019-006,周揚、江行玉,海南大學,BMC Plant Biology ,擬南芥,根部分生區(qū)(距離根尖120μm),Na+、H+
Co-expression of SpSOS1 and SpAHA1 in transgenic Arabidopsis plants improves salinity tolerance
C2019-022,謝潮添,集美大學,Algal research,紫菜,K+、Na+、H+
C2019-026,王瑋、王文強,山東農(nóng)業(yè)大學、棗莊學院,J of integr plant biol,小麥,根部分生區(qū),Na+、K+、H+
C2017-038,何正權(quán)、邱文敏 ,三峽大學、中國林業(yè)科學研究院亞熱帶林業(yè)研究所,Environ Exp Bot,擬南芥,根,Na+、H+
C2018-026,張國平,浙江大學農(nóng)學系,浙江省作物種質(zhì)資源重點實驗室,Plant Cell Physiol ,大麥,根部成熟區(qū),K+、Ca2+、H+
C2019-002,孫健、李宗蕓,江蘇師范大學,J Exp Bot ,甘薯,根,K+、H+、Ca2+、Na+
C2019-004,陳少良,北京林業(yè)大學,New Phytol,楊樹,根(距離根尖300-400μm),NO3-
Amelioration of nitrate uptake under salt stress by ectomycorrhiza with and without a Hartig net
C2019-016,郭巖、楊永青,中國農(nóng)業(yè)大學,Nature Commun,擬南芥,根部分生區(qū),Na+、H+
Calcium-activated 14-3-3 proteins as a molecular switch in salt stress tolerance
C2019-020,李召虎,中國農(nóng)業(yè)大學,New phytol,棉花、擬南芥,根,Ca2+、K+、Na+
C2019-033,楊潤強,南京農(nóng)業(yè)大學,F(xiàn)ood and Chem Toxicol,大麥,Ca2+
C2019-037,別之龍,華中農(nóng)業(yè)大學,J Exp Bot,距離根尖1mm,黃瓜幼苗, K+
C2018-009,別之龍/黃遠,華中農(nóng)業(yè)大學,J EXP BOT,葉脈/葉片/根,Na+/K+
Salt tolerance mechanisms in pumpkin species (Cucurbita)
C2017-026,別之龍,華中農(nóng)業(yè)大學,J EXP BOT,根/下胚軸,Na+/H+
C2016-003,張明才,中國農(nóng)業(yè)大學,J EXP BOT,根,Na+/K+/H+
C2016-002,柳參奎,東北林業(yè)大學,PLANT BIOTECHNOL J,根,Na+
C2015-032,鄭海雷,廈門大學,Scientific Reports,根,Na+/K+
C2015-030,張洪霞,中科院上海植物生理生態(tài)研究所,PLANT BIOTECHNOL J,根,Na+
Overexpression of the PtSOS2 gene improves tolerance to salt stress in transgenic poplar plants
C2015-005,種康,中科院植物所,Cell,根,Ca2+
COLD1 Confers Chilling Tolerance in Rice
F2015-008,PLANT CELL ENVIRON ,黃藻,H+/K+ Na+
F2014-006,PLANT CELL ENVIRON ,根木質(zhì)部,K+
C2013-021,余迪求,中科院西雙版納熱帶植物園,Plant Journal,根,K+
C2012-020,魏建華,北京市農(nóng)林科學院,PLANT CELL ENVIRON ,根,K+/H+
C2012-010,陳少良,北京林業(yè)大學,Plant Physiology,根尖,Na+/K+/H+/Ca2+
C2010-004,陳少良,北京林業(yè)大學,PLANT CELL ENVIRON ,愈傷組織細胞,Na+/K+/H+/Ca2+
C2010-002,郭巖,北京生命科學研究所,Plant Cell,根,H+
C2009-004,陳少良,北京林業(yè)大學,Plant Physiology,根,Na+/Cl-/H+
三、常測哪些指標
1、直接相關(guān)
Na+、K+、Ca2+、H+、Cl-
2、間接相關(guān)
Mg2+、NO3-、NH4+、Cd2+
四、檢測這些離子流、分子流,有什么生物學意義
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1)K+生理功能概述
2)科研案例
a.案例1
與野生型擬南芥相比,wrky8-1突變體在鹽脅迫下K+外排更明顯,而vq9突變體的K+外排速率更低,為WRKY8與VQ9基因參與調(diào)控植物在鹽脅迫下的 Na+/K+離子動態(tài)平衡提供了直接有效的證據(jù)。
Hu Y et al. Arabidopsis transcription factor WRKY8 functions antagonistically with its interacting partner VQ9 to modulate salinity stress tolerance. Plant J. 2013;74(5):730-745.
b.案例2
以中國春、洲元9369和長武134等3種耐鹽性不同小麥品種為材料, 采用非損傷微測技術(shù)檢測鹽脅迫2 d后的根系K+離子流變化。結(jié)果表明鹽脅迫下, 小麥根際的K+大量外流, 鹽敏感品種中國春K+流速顯著高于耐鹽品種長武134。另外,通過對植株體內(nèi)的Na+、K+含量進行測定,共同發(fā)現(xiàn)鹽脅迫下造成小麥組織器官中Na+/K+比上升的主要原因是根系K+大量外流和Na+的過量積累, 耐鹽性不同的小麥品種間差異顯著, 并認為根系對K+的保有能力可能是作物耐鹽性評價的一個重要指標。
王曉冬,王成,馬智宏,侯瑞鋒,高權(quán),陳泉.短期NaCl脅迫對不同小麥品種幼苗K+吸收和Na+、K+積累的影響.生態(tài)學報,2011,31(10):2822-2830.
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2)科研案例
a.案例1
研究利用非損傷微測系統(tǒng)(NMT),檢測了PtVP1.1高表達白楊與野生型經(jīng)0/150 mM NaCl處理后,根部分生區(qū)、伸長區(qū)、成熟區(qū)的Na+、H+流速。結(jié)果顯示,正常生長環(huán)境下,兩組樣品根部Na+流速無差異,對照組H+吸收速率更高。鹽脅迫時,PtVP1.1高表達白楊相比于野生型,其根部具更強的排Na+吸H+能力(Na+外排速率、H+吸收速率均高與野生型)。這一結(jié)果為PtVP1.1提升木本植物耐鹽性提供了活體生理證據(jù)。
Yang Y et al. Overexpression of a Populus trichocarpa H+-pyrophosphatase gene PtVP1.1 confers salt tolerance on transgenic poplar. Tree Physiol. 2015;35(6):663-677.
b.案例2
北京林業(yè)大學陳少良實驗室NMT測定了抗鹽品種胡楊和鹽敏感型品種群眾楊根、細胞和原生質(zhì)體的H+、Na+和Cl-流速,比較了短期處理和長期處理后兩個品種間排Na+的能力。長期脅迫導致根原生質(zhì)體Na+外流增加,H+內(nèi)流增加。這種NaCl誘導的Na+/H+交換被Amiloride和礬酸鈉抑制,說明脅迫后胡楊Na+的排出是Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運體主動跨膜的結(jié)果。
Sun J et al. NaCl-induced alternations of cellular and tissue ion fluxes in roots of salt-resistant and salt-sensitive poplar species. Plant Physiol. 2009;149(2):1141-1153.
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2)科研案例
a.案例1
NaCl處理1-2min后觀察到煙草根部伸長區(qū)有瞬時的Ca2+外排現(xiàn)象,NaCl處理24h后,觀察到Ca2+內(nèi)流,低濃度的甜菜堿則會顯著的增加NaCl誘導的Ca2+內(nèi)流。加上對相關(guān)基因表達的測定、Ca2+含量的測定等內(nèi)容,表明在NaCl誘導的Ca2+滲透流中,甜菜堿起到了輔助因子的作用。
Li M et al. Glycine betaine-mediated potentiation of HSP gene expression involves calcium signaling pathways in tobacco exposed to NaCl stress. Physiol Plant. 2014;150(1):63-75.
b.案例2
本試驗以油用向日葵鹽敏感品種‘YK18’、中度耐鹽品種‘YK06’和耐鹽品種‘GF01’為試驗材料,利用離子流檢測技術(shù), 動態(tài)監(jiān)測了復(fù)合鹽脅迫24 h后植株根系的 K+、Na+、Ca2+等離子的流速流向,結(jié)果表明,鹽脅迫下向日葵幼苗根系Ca2+的吸收速率加快,‘GF01’是‘YK18’的2倍。結(jié)合種子萌發(fā)和離子在萌發(fā)幼苗中積累分布情況的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同耐鹽性的油用向日葵植株在鹽脅迫下可通過調(diào)節(jié)Na+、K+和Ca2+的吸收與外排來適應(yīng)鹽脅迫環(huán)境,為鹽堿地耐鹽品種篩選和栽培提供理論依據(jù)。
馬榮,王成,馬慶,侯佩臣,王曉冬.向日葵芽苗期離子對復(fù)合鹽脅迫的響應(yīng).中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學報,2017,25(05):720-729.
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1)H+生理功能概述
2)科研案例
a.案例1
研究采用了同一品種的二倍體及四倍體水稻,分別培養(yǎng)在含有0、150 mM NaCl的1/2 MS培養(yǎng)基中。利用非損傷微測技術(shù),檢測了各組樣品根部距離根尖0-5000 μm范圍的H+流速。結(jié)果顯示,距離根尖0-1000 μm范圍內(nèi),兩組樣品H+流速沒有差異,而且在500-1000 μm之間,H+表現(xiàn)為吸收。從距離根尖1000 μm的位點開始至2000 μm,H+外排趨勢逐漸增大并達到穩(wěn)定值。二倍體與四倍體根尖H+流速對比顯示,1000-5000 μm區(qū)間內(nèi),后者H+外排速率顯著高于前者,這也間接反映了四倍體植株的根內(nèi)pH較二倍體低。研究認為,基因組重復(fù)可提升水稻耐鹽能力,而這一現(xiàn)象可能與四倍體水稻加強了H+外排至根表面從而減少Na+的進入根部有關(guān)。
Tu Y, Jiang A, Gan L, et al. Genome duplication improves rice root resistance to salt stress. Rice (N Y). 2014;7(1):15.
b.案例2
當植物缺乏J3時對外部的鹽堿脅迫超敏感,質(zhì)膜H+-ATPase的活性也下降。使用非損傷微測技術(shù)在活體擬南芥的根部進行了原位測量,證實不同的基因所調(diào)控的H+外排的差異,說明了蛋白之間的相互作用。本研究發(fā)現(xiàn),分子伴侶蛋白J3可以和PKS5相互作用,并且抑制PKS5激酶活性,進而正向調(diào)節(jié)質(zhì)膜H+-ATPase的活性及植物對鹽堿脅迫的反應(yīng)。
Yang Y, Qin Y, Xie C, et al. The Arabidopsis chaperone J3 regulates the plasma membrane H+-ATPase through interaction with the PKS5 kinase. Plant Cell. 2010;22(4):1313-1332.
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2)科研案例
a.案例1
與單個鹽腺相比,二色補血草的氣孔和表皮細胞分泌的Na+、K+和Cl-很少,NaCl處理對它們的分泌率沒有顯著影響。在本研究中,200 mmol/L NaCl處理可顯著提高鹽腺的Cl-分泌率,且NaCl處理的Cl-分泌率是對照組的35倍。結(jié)合Na+通量檢測和ESEM分析等結(jié)果,表明鹽腺通過分泌孔分泌離子,并以Na+和Cl-為主。分泌速率的增加有助于抵消葉片中鹽濃度的增加。分泌的選擇性有助于保持葉片細胞內(nèi)良好的Na+/K+和Cl-/陰離子比值。
Feng Z , Sun Q , Deng Y , et al. Study on pathway and characteristics of ion secretion of salt glands of Limonium bicolor. Acta Physiologiae Plantarum, 2014, 36(10):2729-2741.
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2)科研案例
影響光合作用,葉綠素的組成成分、酶的活化劑;與糖代謝、氮代謝相關(guān);影響核酸和蛋白質(zhì)代謝;參與脂肪代謝、促進維生素合成。
例1:以甘薯的兩個品種(耐鹽品種Xu 22和鹽敏感品種Shi 5)為實驗材料,對其在NaCl脅迫下的K+、Cl-、Mg2+等離子進行通量檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)NaCl促進了Xu 22根系對Mg2+的吸收,但使Shi 5根Mg2+的外排增加。結(jié)合其他離子通量、離子含量、qPCR驗證等實驗結(jié)果,表明,Xu 22不定根期具有較好的K+、Mg2+截留能力、液泡Na+和Cl-固存能力、NH4+/NO3-轉(zhuǎn)運轉(zhuǎn)化能力和N同化維持能力是其耐鹽性的主要原因。
Yicheng Yu et al. NaCl-induced changes of ion homeostasis and nitrogen metabolism in two sweet potato (Ipomoea batatas L.) cultivars exhibit different salt tolerance at adventitious root stage. Environmental and Experimental Botany, 2016. doi: 10.1016/j.envexpbot.2015.12.006
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五、可以檢測哪些樣品
1、動物樣品
1)細胞
神經(jīng)細胞、腫瘤細胞、巨噬細胞、淋巴細胞等
2)組織器官
腫瘤、皮膚、胃粘膜、胰島、腦(海馬體等)、胚胎(大鼠、魚)、斑馬魚皮膚/鰓、耳蝸、心臟(香螺)、卵(魚、雞蛋、爪蟾)、骨骼、角膜、脊椎(豚鼠)、肌肉組織(肌纖維、心?。?/p>
3)其它動物樣品
珊瑚、螨蟲、昆蟲(果蠅幼蟲的腸、蟑螂血腦屏障、按蚊、長紅錐蝽)、蝌蚪、水蛭、藍蟹(微感毛)、變形蟲、水絲蚓
2、植物樣品
1)營養(yǎng)器官
莖:邊材、心材、微管形成層、木質(zhì)部
2)生殖器官
花:花瓣、花瓣表皮細胞、花粉
種子:整體、胚
果實:果殼、果皮、果肉(蘋果、柑橘)、籽粒、棉花纖維、棉桃
3)細胞:植物懸浮細胞、液泡
4)愈傷組織
3、微生物樣品
酵母細胞、菌絲、菌落、微藻、細菌(大腸桿菌)
4、其它生物樣品
周叢生物
5、非生物樣品
金屬、混凝土、泥沙、納米材料、生物醫(yī)藥材料
六、樣品需要做哪些前處理
國際領(lǐng)先的非損傷微測技術(shù)最大的特點就是活體、無損檢測,因此動植物材料在檢測前,不需要任何的液氮速凍、染色、研磨處理等。
1、動物單細胞
因NMT是活體檢測,故從培養(yǎng)箱中拿出來后,置于培養(yǎng)皿中,直接檢測即可。
2、動物組織
因NMT是活體檢測,無需提前處理。如檢測部位天然暴露在外,如斑馬魚皮膚離子細胞、側(cè)線毛細胞,直接檢測即可。如檢測部位位于體內(nèi),需在檢測時暴露出檢測部位(可采用麻醉的方式),后檢測即可。
3、植物根莖葉等組織器官
天然暴露在外的組織器官,例如根、莖、葉的表面,無需任何處理,直接檢測即可。水培、土培、砂培、平板培養(yǎng)均可。
4、植物原生質(zhì)體/液泡
因NMT是基于微傳感器/探針的非損傷檢測,檢測時不接觸樣品,故原生質(zhì)體、液泡需要從組織或者細胞中,提取出來后檢測。
5、植物葉片的表皮細胞、葉肉細胞、鹽腺細胞、保衛(wèi)細胞
無需提前處理。因這些細胞處于組織內(nèi)部,故檢測時采用撕取等方式,暴露出相應(yīng)細胞即可。
6、植物花粉管
離體萌發(fā):在培養(yǎng)皿中萌發(fā)一段時間后即可直接檢測;在體萌發(fā):將柱頭置于培養(yǎng)皿中,待萌發(fā)一段時間后即可直接檢測。
7、植物果實
無需提前處理。如待測部位位于果實內(nèi)部,需在檢測前暴露出相應(yīng)部位即可。
8、植物懸浮細胞
無需提前處理。檢測時,置于培養(yǎng)皿中檢測即可。
七、有哪些檢測方式?
即瞬時處理,是指在檢測過程中,在正常測試液中瞬間加入所需的干旱脅迫溶液(PEG或甘露醇等溶液)的處理方法,目的是為了觀察瞬間干旱脅迫下,樣品短時間內(nèi)的離子/分子的變化趨勢,即短時效應(yīng)。
2、預(yù)處理/提前處理好后檢測
是指在干旱脅迫一段較長的時間后(數(shù)十分鐘/數(shù)小時/數(shù)天),觀察植物離子/分子進出的情況,即長時效應(yīng)。
八、檢測環(huán)境是空氣還是溶液
檢測時,只要求待測部位浸于溶液中(無需整體都浸在溶液里)。
九、樣品是如何檢測的
十、可以送樣檢測嗎
可以送樣檢測。目前非損傷微測技術(shù)測試服務(wù)由中關(guān)村NMT產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟統(tǒng)籌管理,由遍布全國的25家NMT創(chuàng)新平臺服務(wù)中心,提供檢測服務(wù)。點擊獲取測試服務(wù)