斑馬魚(yú)NMT標(biāo)準(zhǔn)化方案
斑馬魚(yú)NMT標(biāo)準(zhǔn)化方案
一、視頻資源
二、參考文獻(xiàn)
三、常測(cè)哪些指標(biāo)
H+、NH4+、Ca2+、Na+、K+
四、檢測(cè)這些離子流、分子流，有什么生物學(xué)意義
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2）科研案例
本研究以斑馬魚(yú)胚胎為模式物種，評(píng)估順鉑的亞致死濃度劑量對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的影響。利用 NMT 技術(shù)，我們偵測(cè)毛細(xì)胞的鈣離子流以及離子細(xì)胞的氫離子流變化來(lái)評(píng)估毛細(xì)胞和離子細(xì)胞的功能是否受損。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在1 μM的劑量下，毛細(xì)胞的功能以及細(xì)胞數(shù)目即明顯下降；而體內(nèi)氯離子的含量則是在10 μM的劑量才顯著下降；在50 μM 的劑量下則觀察到離子細(xì)胞氫離子的流出和體內(nèi)鈉離子和鈣離子的含量明顯減少；而在100 μM的劑量下則出現(xiàn)胚胎體長(zhǎng)變短和表皮離子細(xì)胞數(shù)目減少；劑量達(dá)到500 μM時(shí)則開(kāi)始顯著影響胚胎的存活率。隨著順鉑濃度的增加，胚胎體內(nèi)的鉑累積濃度也隨之增加。上述結(jié)果顯示毛細(xì)胞對(duì)于順鉑毒性的敏感度高于離子細(xì)胞。
Hung GY, Wu CL, Chou YL, Chien CT, Horng JL, Lin LY. Cisplatin exposure impairs ionocytes and hair cells in the skin of zebrafish embryos. Aquat Toxicol. 2019;209:168-177.
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2）科研案例
對(duì)斑馬魚(yú)幼體皮膚上特定細(xì)胞的H+和NH4+外排通量進(jìn)行了測(cè)定。在富含H+泵的細(xì)胞中NH4+的外排量相對(duì)較高，被認(rèn)為是斑馬魚(yú)分泌H+的離子細(xì)胞。幼蟲(chóng)皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞和其他類(lèi)型的離子細(xì)胞也有少量NH4+外排。從皮膚中排出的NH4+與酸分泌密切相關(guān)。本研究證實(shí)了幼蟲(chóng)皮膚上皮細(xì)胞的排氨是通過(guò)酸捕獲機(jī)制進(jìn)行的，這為H+泵和Rh糖蛋白（Rhcg1）參與排氨提供了直接證據(jù)
Shih TH, Horng JL, Hwang PP, Lin LY. Ammonia excretion by the skin of zebrafish (Danio rerio) larvae. Am J Physiol Cell Physiol. 2008;295(6):C1625-C1632.
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1）K+生理功能概述
2）科研案例
在斑馬魚(yú)的神經(jīng)丘中未檢測(cè)到K+流入，結(jié)合其他結(jié)果，表明在淡水環(huán)境中的MET通道傳導(dǎo)的是Ca2+而不是K+。因?yàn)榈械腒+含量遠(yuǎn)低于細(xì)胞內(nèi)K+含量。此外發(fā)現(xiàn)，提高外部K+（5 mM）不會(huì)干擾Ca2+通過(guò)MET通道的進(jìn)入。因此，神經(jīng)丘MET通道和內(nèi)耳MET通道的離子選擇性可能不同。
Lin LY, Pang W, Chuang WM, Hung GY, Lin YH, Horng JL. Extracellular Ca(2+) and Mg(2+) modulate aminoglycoside blockade of mechanotransducer channel-mediated Ca(2+) entry in zebrafish hair cells: an in vivo study with the SIET. Am J Physiol Cell Physiol. 2013;305(10):C1060-C1068.
五、可以檢測(cè)哪些樣品
1、動(dòng)物樣品
1）細(xì)胞
神經(jīng)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等
2）組織器官
腫瘤、皮膚、胃粘膜、胰島、腦（海馬體等）、胚胎（大鼠、魚(yú)）、斑馬魚(yú)皮膚/鰓、耳蝸、心臟（香螺）、卵（魚(yú)、雞蛋、爪蟾）、骨骼、角膜、脊椎（豚鼠）、肌肉組織（肌纖維、心?。?/p>
3）其它動(dòng)物樣品
珊瑚、螨蟲(chóng)、昆蟲(chóng)（果蠅幼蟲(chóng)的腸、蟑螂血腦屏障、按蚊、長(zhǎng)紅錐蝽）、蝌蚪、水蛭、藍(lán)蟹（微感毛）、變形蟲(chóng)、水絲蚓
2、植物樣品
1）營(yíng)養(yǎng)器官
莖：邊材、心材、微管形成層、木質(zhì)部
葉：表皮細(xì)胞、葉肉細(xì)胞、鹽腺細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞
2）生殖器官
花：花瓣、花瓣表皮細(xì)胞、花粉
種子：整體、胚
果實(shí)：果殼、果皮、果肉（蘋(píng)果、柑橘）、籽粒、棉花纖維、棉桃
3）細(xì)胞：植物懸浮細(xì)胞、液泡
4）愈傷組織
3、微生物樣品
酵母細(xì)胞、菌絲、菌落、微藻、細(xì)菌（大腸桿菌）
4、其它生物樣品
周叢生物
5、非生物樣品
金屬、混凝土、泥沙、納米材料、生物醫(yī)藥材料
六、樣品需要做哪些前處理
國(guó)際領(lǐng)先的非損傷微測(cè)技術(shù)最大的特點(diǎn)就是活體、無(wú)損檢測(cè)，因此動(dòng)植物材料在檢測(cè)前，不需要任何的液氮速凍、染色、研磨處理等。
1、動(dòng)物單細(xì)胞
因NMT是活體檢測(cè)，故從培養(yǎng)箱中拿出來(lái)后，置于培養(yǎng)皿中，直接檢測(cè)即可。
2、動(dòng)物組織
因NMT是活體檢測(cè)，無(wú)需提前處理。如檢測(cè)部位天然暴露在外，如斑馬魚(yú)皮膚離子細(xì)胞、側(cè)線毛細(xì)胞，直接檢測(cè)即可。如檢測(cè)部位位于體內(nèi)，需在檢測(cè)時(shí)暴露出檢測(cè)部位（可采用麻醉的方式），后檢測(cè)即可。
3、植物根莖葉等組織器官
天然暴露在外的組織器官，例如根、莖、葉的表面，無(wú)需任何處理，直接檢測(cè)即可。水培、土培、砂培、平板培養(yǎng)均可。
4、植物原生質(zhì)體/液泡
因NMT是基于微傳感器/探針的非損傷檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)不接觸樣品，故原生質(zhì)體、液泡需要從組織或者細(xì)胞中，提取出來(lái)后檢測(cè)。
5、植物葉片的表皮細(xì)胞、葉肉細(xì)胞、鹽腺細(xì)胞、保衛(wèi)細(xì)胞
無(wú)需提前處理。因這些細(xì)胞處于組織內(nèi)部，故檢測(cè)時(shí)采用撕取等方式，暴露出相應(yīng)細(xì)胞即可。
6、植物花粉管
離體萌發(fā)：在培養(yǎng)皿中萌發(fā)一段時(shí)間后即可直接檢測(cè)；在體萌發(fā)：將柱頭置于培養(yǎng)皿中，待萌發(fā)一段時(shí)間后即可直接檢測(cè)。
7、植物果實(shí)
無(wú)需提前處理。如待測(cè)部位位于果實(shí)內(nèi)部，需在檢測(cè)前暴露出相應(yīng)部位即可。
8、植物懸浮細(xì)胞
無(wú)需提前處理。檢測(cè)時(shí)，置于培養(yǎng)皿中檢測(cè)即可。
七、有哪些檢測(cè)方式？
1、實(shí)時(shí)處理 /瞬時(shí)處理后檢測(cè)
即瞬時(shí)處理，是指在檢測(cè)過(guò)程中，在正常測(cè)試液中瞬間加入所需的干旱脅迫溶液（PEG或甘露醇等溶液）的處理方法，目的是為了觀察瞬間干旱脅迫下，樣品短時(shí)間內(nèi)的離子/分子的變化趨勢(shì)，即短時(shí)效應(yīng)。
2、預(yù)處理/提前處理好后檢測(cè)
是指在干旱脅迫一段較長(zhǎng)的時(shí)間后（數(shù)十分鐘/數(shù)小時(shí)/數(shù)天），觀察植物離子/分子進(jìn)出的情況，即長(zhǎng)時(shí)效應(yīng)。
八、檢測(cè)環(huán)境是空氣還是溶液
檢測(cè)時(shí)，只要求待測(cè)部位浸于溶液中（無(wú)需整體都浸在溶液里）。
九、樣品是如何檢測(cè)的
十、可以送樣檢測(cè)嗎
可以送樣檢測(cè)。目前非損傷微測(cè)技術(shù)測(cè)試服務(wù)由中關(guān)村NMT產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟統(tǒng)籌管理，由遍布全國(guó)的25家NMT創(chuàng)新平臺(tái)服務(wù)中心，提供檢測(cè)服務(wù)。點(diǎn)擊獲取測(cè)試服務(wù)
十一、哪里能獲取非損傷微測(cè)系統(tǒng)操作培訓(xùn)服務(wù)
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